لیست اختراعات مهدی فروزنده مقدم
مطالعات حاكي از آن است كه از اگزوزوم هاي هدفمند نشان دار شده با راديونوكلئيد ها مي توان جهت تشخيص محل تومور استفاده نمود. اين كار نياز به نشانداركردن اگزوزوم با مواد راديو اكتيو دارد. مطالعات بسيار كمي در زمينه نشاندارسازي اين نانوذرات با راديوايزوتوپها تاكنون صورت گرفته است. از سوي ديگر مي توان اين نانوذرات را به گونه اي مهندسي نمود كه در سطح آنها ليگند هايي به تمايل بالا به رسپتورهاي گوناگون بيان شود. براي مثال تا كنون پپتيدهايي براي اتصال به گيرنده هايي مانند HER2 طراحي شده است. كه مي توان آنها را در سطح اگزوزوم بيان نمود و از اين رو به نانوذراتي كه به طور اختصاصي به گيرنده HER2 متصل مي شوند دست يافت. يكي از اين ليگاند ها پروتئين G3 دارپين است. اگزوزم هاي هدفمند داراي تگ هيستيديني ( 6 هيستيدين در انتهاي ليگاند دارپيني) در سطح خود هستند از اين رو با كمپلكس 99mTc(H2O)3(CO)3+ واكنش مي دهد و به هيستيدين هاي ليگاند متصل گرديد. دماي محيط براي نشاندارسازي استفاده شد كه به حفظ ساختار و اندازه ي نانوذرات كمك مي كند. كنترول كيفي نانوذرات نشاندار در حلال استيك اسيد 0.1 ملار با استفاده از TLC انجام شد. از آنجا كه كمپلكس 99mTc(H2O)3(CO)3+ حلال استيك اسيد 0.1 ملار در TLC فاكتور بازداري برابر 0.3-0.5 دارد و اين مقدار براي نانوذرات برابر صفر است لذا اين نانوذرات با رانمان بالا 98 درصد نشاندار شده اند. بررسي هاي سايز نانوذرات با استفاده از DLS تغير اندازه ي معني داري براي نانوذرات قبل و بعد از نشاندارسازي نشان نداد.
تكنيك حاضر، روشي نوين جهت تشخيص محصول تكثير اسيدهاي نوكلئيك در دماي ثابت است و قادر است در مدت زمان 5 دقيقه محصول تكثير را تشخيص دهد. با تركيب خواص مولكولي ويژه اليگونوكلئوتيدها و خواص اپتيك منحصر به فرد نانوذرات، يك تست ساده و ارزان معرفي شده كه منجر به تثبيت و تشخيص بصري توالي تكثير يافته با استفاده از هيبريداسيون طي چند دقيقه مي شود. تست فوق بر روي يك استريپ و بدون نياز به ابزار خاصي انجام مي شود. با استفاده از پرايمر نشاندار با بيوتين ناحيه ژني مورد نظر تكثير مي گردد، سپس با پروب ويژه حاوي dA-tailed هيبريد مي شود. مخلوط حاصل بر روي استريپ اعمال مي شود، با حركت بافر در طول استريپ با فعاليت كاپيلاري نانو ذرات طلا كونژوگه با اليگو dT متصل به سطح استريپ رهيدراته شده و در نهايت منجر به اتصال DNA هدف به نانوذرات از طريق هيبريداسيون مي گردد. هيبريد در ناحيه تست استريپ به وسيله استرپتاويدين به دام مي افتد و يك خط قرمز مشخص ايجاد مي كند. نانوذرات اتصال نيافته به وسيله رشته اليگو dA كه در ناحيه كنترل استريپ فيكس شده به دام مي افتد و خط قرمز دوم را ايجاد مي كنندن كه نشانه كاركرد درست تست مي باشد. در تكنيك CMA جهت تكثير DNA از دو آنزيم rBst Large Fragment DNA Polymerase و RNase H به همراه يك جفت پرايمر كايمريك استفاده شده است. در اين تكنيك CMA پديده Template Switching رخ مي دهد كه به دليل عملكرد خاص آنزيم DNA Polymerase است. و به اين دليل علانه بر قطعه مورد نظر، قطعات تكثير يافته با طول هاي متفاوت كه ماحصل اين خاصيت آنزيم است مشاهده مي شود.
در سالهاي اخير mRNA مربوط به آنتي ژن ويژه پروستات به عنوان ماركر بالقوه اي جهت molcular staging سرطان پروستات مورد بررس قرار گرفته است. آناليز محصولات تكثير يافته حاصل از تكنيك هاي تكثير DNA و RNA با چند تكنيك آزمايشگاهي مانند الكتروفورز، كاپيلاري الكتروفورز و .. است. اين تكنيك ها زمان بر، نيازمند ابزار ويژه و اغلب از رنگهاي خطرناك استفاده مي كنند. در حال حاصر اگارز ژل الكتروفورز رايجترين تكنيك جهت تشخيص محصولات PCR مي باشد. متدهاي الكتروفورتيك جهت تشخيص توالي نوكلئيك اسيد اختصاصيت ندارند و فقط اطلاعاتي در مورد اندازه DNA آناليز شده مي دهند. با تركيب خواص مولكولي ويژه اليگونوكلئوتيدها و خواص اپتيك منحصر به فرد نانوذرات طلا، يك تست ساده ارزان معرفي شده كه منجر به تثبيت و تشخيص بصري توالي تكثير يافته با استفاده از هيبريداسيون طي چند دقيقه مي شود. تست فوق بر روي يك نوار يا استريپ و بدون نياز به ابزار خاصي انجام مي شود. با استفاده از پرايمر نشاندار با ديگوكسوژنين ناحيه ژني مورد نظر تكثير مي گردد. سپس با پروب ويژه حاوي dA-tailed هيبريد مي شود. مخلوط حاصل بر روي نوار اعمال مي شود. با حركت بافر در طول استريپ با فعاليت كاپيلاري نانو ذرات طلا كونژوگه با اليگو dT متصل به سطح نوار رهيدراته شده و در نهايت منجر به اتصال DNA هدف به نانوذرات طلا از طريق هيبريداسيون مي گردد. هيبريد در ناحيه تست نوار به وسيله آنتي ديگوكسوژنين به دام مي افتد و يك خط قرمز مشخص ايجاد مي كند. نانوذرات طلا اتصال نيافته به وسيله رشته اليگو dA كه در ناحيه كنترل نوار فيكس شده به دام مي افتد و خط قرمز دوم را ايجاد مي كنند كه نشانه كاركرد درست تست مي باشد. در اين پروژه خطوط كنترل و تست با نانوذرات طلا 40 و 17 نانومتري بهينه شد، كه حساسيت حاصل از دو نانوذره طلا مشابه بود. اين تست بر روي محصول PCR كه به دنبال واكنش RT-PCR بر روي mRNA ژن PSA حاصل گرديد، انجام شد. اين تست در زمان كمتر از 1/5 ساعت با احتساب بيشترين زمان جهت PCR انجام گرديد.
علي رغم پيشرفت هاي گسترده در حوزه پيشگيري، تشخيص و درمان بيماري هاي عفوني، مقابله با اين دسته از بيماري ها هنوز به عنوان يكي از چالش هاي بزرگ در حوزه پزشكي در سراسر جهان محسوب مي گردد. بنابراين نياز به گسترش تكنيك هاي جديد در تشخيص سريع و دقيق ميكروارگانيسم هاي پاتوژن جهت كنترل و درمان بيماري هاي عفوني وجود دارد. در اين مطالعه يك نانوبيوسنسور الكتروشيميايي بسيار حساس بر پايه استراتژي تقويت سيگنال دوگانه با به كار گيري نانوكامپوزيت پلي آنيلين/ نانو ذرات طلا و آنزيم هورس راديش پراكسيداز (HRP) به ترتيب به عنوان پلت فرم و ماركر جهت شناسايي سريع باكتري اشرشيا كلي طراحي گرديد. اين بيوسنسور مي تواند 106×4 تا 4 سلول از باكتري اشرشيا كلي را مستقيم و بدون نياز به تكثيرDNA در مدت زمان كمتر از 70 دقيقه شناسايي كند. نتايج به دست آمده حاكي از اين است كه سيستم طراحي شده داراي پتانسيل مناسبي جهت شناسايي سريع و دقيق توالي هاي DNA ايي و عفونت هاي مرتبط با باكتري اشرشياكلي به ويژه عفونت هاي دستگاه ادراري مي باشد.
موارد یافت شده: 15